jueves, 25 de junio de 2009

practicas finales/ practica numero 6 tincion de gram

C.B.T.I.S 155

Acosta Flores Iván Ulises
Águila cabrera oscar Uriel
Castillo Villarreal cesar Manuel
García segura Erik Guadalupe
Martínez miranda Roberto
Ponce Sánchez Erika
Yepiz Quezada Arturo Adrián


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DEL LABORATORIO


MESA: 6


PRACTICA 6: TINCION DE GRAM


2L2M


Víctor Manuel Alfaro López
OBJETIVO

Conocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento y observar las bacterias en microscopio clasificándolas en Gram. Positivas y Gram. Negativas.

Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.



Practica: 6 tinción de Gram.

MATERIALES

Mesa de trabajo
Frotis ya realizado
Soluciones de, cristal violeta, yodo lugol, acetona, safranina.
Microscopio
2 mecheros de bunsen
Aceite de inmersión
Asas bacteriológicas
Agua destilada
Vaso de precipitado de 50 ml
Cajas petri con medio de cultivo
Campo de esterilización
Papel secante
Torundas de algodón

INVESTIGACION DE TINCION DE GRAM:
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram. positivas como Graham negativas).
El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina)
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no arrastre más colorante.
Sigue a tal tratamiento una coloración de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo.
Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gramnegativos. Basándonos pues, en la reacción Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.


PASOS PARA LA TECNICA DE TINCION DE GRAM:

1. prepara el frotis y fijar a calor
2. colocar la preparación con la solución de cristal violeta sumergirla durante(1mn)
3. lavar con solución yodada (lugol)
4. cubrir el frotis durante con solución lugol durante (1mn)
5. escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violeta
6. lavar con agua corriente
7. contrastar con la solución safranina
8. lavar con agua corriente y secar al aire
9. observar con el microscopio con una gota de aceite de inmersión en objetivo (100x)



DESARROLLO:

Los materiales como las asas bacteriológicas no tienen nada que ver con la tinción de Gram., solo se volvieron a poner ala mesa por que algunos de los alumnos no pudieron completar la práctica a su tiempo y si había algún error en la tinción se tenía la oportunidad de volver hacer el frotis e intentar de nuevo la tinción.

Se llevo el portaobjetos al lavamanos, se colocaron recipientes con las soluciones de (acetona, yugol, cristal violeta, safranina), se tomo el portaobjetos y se sumergió en el recipiente donde contenía el cristal violeta durante 1mn, después se sumergió en el yodo lugol durante 1mn, se lavo con la acetona hasta que ya no escurriera mas cristal violeta, posteriormente se sumergió en la safranian durante 1mn y finalmente se lavo con agua corriente, se seco al aire libre y séle coloco una gota de inmersión para fijarlo en el microscopio con objetivo 1000x.






Desarrollo grafico



Cristal violeta durante 1mn.


Yodo lugol durante 1mn




Se vacío acetona para limpiar el cristal violeta hasta que ya no escurriera más de este.




Se vacío safranina durante 1mn

Se lavo con agua corriente para limpiarlo de la safranina y se seco al aire libre.

Séle acho una pequeña gota de aceite de palo (aceite de inmersión) para su vista en el microscopio.


Se observo através del microscopio.


Se observaron bacilos, de color rojo y por lo tanto los microorganismos son gramnegativos.













CONCLUSION

Las bacterias que se observaron salieron de color rojo y eso quiere decir que salieron gramnegativas y supimos como manejar la tinción de Gram. Aunque hubo muchos errores, pero para la otra saldrá mucho mejor.

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